쥐 글루타티온 환원효소(GSR) ELISA 키트 실험설명서

BS-3507 쥐 글루타티온 환원효소(GSR) ELISA 키트

1. 실험원리

이 시약함은 이중항체 협심효소연면역흡착법(ELISA)으로 쥐의 글루타티온 환원효소(GSR) 활성을 검사한다.항생쥐 GSR 항체 패키지를 마이크로 보드에 넣고 측정 대기 샘플을 넣은 후 샘플의 GSR과 패키지가 항체에 결합됩니다.이어 바이오매스 표기의 검사 항체를 넣어'항체-항원-효소 표적 항체'복합물을 형성한다.매운 뿌리 과산화물 효소(HRP)로 표시된 스트렙토마이신 친화소(SABC)를 넣은 뒤 TMB 바탕 발색을 통해 450nm 파장에서 흡광도(OD값)를 측정하면 OD값이 샘플의 GSR 농도와 상관관계를 보인다.

2. 시약함 구성

그룹 48 구멍 구성 96 구멍 구성 저장 조건

프리팩 피효소 표지판 8 × 6개 8 × 12개 2-8 ℃

표준품(동결건조) 1개 1개 2~8℃

표준품/시료 희석액 10mL 15mL 2-8℃

바이오매스 검사 항체 60 μL (100 ×) 120 μL (100 ×) -20 ℃

바이오매스 항체 희석액 6mL 12mL 2-8 ℃

SABC 복합체 6mL 12mL 2-8℃

TMB 발색액(A/B) 각 3mL 각 6mL 피광 2-8℃

종료액 6mL 12mL 2-8 ℃

20×농축 세척액 30mL 60mL 실온

봉판막 2장 4장 실온

설명서 1부 1부-

3. 견본처리

혈청/혈장 샘플:

전혈실 온도는 2시간 또는 4 ℃ 로 정치하여 밤을 보내고, 1000g은 20분간 원심을 떠나 제거한다.

용혈 또는 고지혈지 샘플을 피하고 2-8 ℃ 로 48 시간 보관 할 수 있습니다.장기간 보존하려면 -20 ℃ 또는 -80 ℃ 가 필요하며 반복적으로 얼지 않도록 해야 한다.

조직 / 세포 샘플:

조직균장이나 세포가 분해되면 원심분리에서 청을 취하고 단백질농도를 추천범위로 조정한다.

4. 실험절차

세제 조제:

20×농축세척액을 증류수로 20배(예: 1mL 농축액+19mL 증류수) 희석한다.

표준품 희석:

원심관 7개를 분리하여 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64, 공백(Blank)을 표시합니다.

각 관은 표준품/시료 희석액 200μL를 첨가하고, 첫 관은 표준품 원액 200μL를 첨가하여 골고루 섞은 후 단계별로 희석한다.

샘플링 및 부화:

구멍당 100 μL 표준품 또는 샘플을 넣고 37 ℃ 에서 90 분 동안 부화시킵니다.

액체를 버리고 3회 세탁(1~2분 정도 물에 담가요).

효소 표지 항체 반응:

구멍당 100μL의 바이오매스 검사 항체(1:100으로 희석)를 넣고 37도에서 60분간 부화한다.

세 번 세탁.

SABC 복합체 반응:

구멍당 100 μL SABC 복합체를 넣어 37 ℃ 에서 30분 동안 부화시킨다.

세 번 세탁.

발색 및 끝:

구멍당 90μL TMB 발색액(A/B 액체 등량 혼합)을 넣어 빛을 피하고 37℃에서 15분간 부화한다.

구멍마다 종료액 50μL를 넣고 섞으면 바로 측정한다.

5. 결과 계산

표준 농도는 가로 (X), OD값은 세로 (Y) 로 표준 커브를 그립니다.

샘플 OD값에 따라 표준 곡선 방정식을 대입하여 GSR 농도를 계산합니다.

6. 주의사항

시약 보존:

표준품, 생물소화항체는 -20 ℃ 로 보존해야 하며 반복적으로 얼지 않도록 해야 한다.다른 그룹은 2-8 ℃ 로 저장됩니다.

샘플 처리:

용혈, 고지혈증 또는 혼탁 샘플 사용을 피한다;조직 견본은 충분히 고르게 해야 한다.

작업 사양:

이액은 정확해야 하며 교차오염을 피해야 한다.세탁 수요, 잔류 액체 영향 결과.

계기 교정:

효소 측정기의 파장은 450nm까지 교정해야 하며, 공백 구멍은 0으로 조정해야 한다.

보안:

종지액은 황산을 함유하고 있으며, 조작 시 장갑과 고글을 착용한다.

7. 예상 결과

감도: 0.156ng/mL 미만의 GSR을 감지할 수 있습니다.

선형 범위: 0.156-10ng/mL.

8. 응용범위

이 시약함은 쥐의 혈청, 혈장, 조직 균장 및 세포 배양 상청액 중 GSR의 정량 검사, 과학 연구 용도에 적합하다.

제시: 구체적인 조작은 실제 시약함 설명서를 기준으로 하고, 실험 전에 완전한 설명을 읽고 그룹의 완전성을 확인해야 한다.

주: 이상은 참고용으로만 제공되며 본 시약은 과학연구에만 사용되며 실제수치로 삼지 않으며 실험은 설명을 엄격히 따르거나 기술선생님에게 자문해야 한다.