사람 글루타티온 과산화물 효소 4 (GPX4) ELISA 검사 키트 기술 설명서

BS-9843인 글루타티온 과산화물 효소 4 (GPX4) ELISA 키트

제품 개요

이 시약함은 이중항체 1단계 협심효소연면역흡착법 (ELISA) 을 채용하여 체외정량으로 사람의 혈청, 혈장, 조직균장, 세포분해액 및 세포배양상청 등 견본중의 글루타티온과산화물효소4 (GPX4) 농도를 검사하는데 사용한다.GPX4는 글루타티온 과산화물 효소 가족의 핵심 구성원으로 환원형 글루타티온 (GSH) 을 촉매해 지질 과산화물을 제거하고 철 폐사 억제, 세포막 완전성 유지 및 항산화 스트레스에 핵심 역할을 한다.

검측 원리

이중 항체 협심법: 가방 피항체는 샘플 중 GPX4와 결합하고, 바이오매스 표기 항체는 복합체를 형성하며, 매운 뿌리 과산화물 효소 (HRP) 표기의 스트렙토마이신 친화소는 발색 반응을 촉매하며, 발색 강도는 샘플 중 GPX4 농도와 정비례한다.

특이성: 특이성 인식 GPX4, 유사물과 교차 반응이 없어 검사 정확성을 확보한다.

시약함 구성

구성 사양 / 설명

사전 패키지는 마이크로 보드 96 보드, 항인 GPX4 항체 포함

표준품 동결건조분, 재조합인 GPX4 단백질, 림용전에 희석액으로 재용해

바이오매스 마커 항체 액체, HRP 마커 항인 GPX4 항체

발색 바탕 물질(TMB) 액체, 3, 3', 5, 5'- 테트라메틸 아닐린 용해액

종료액 2M 황산 용해액

세척 완충액 20×농축액, 토온-20 함유

샘플 희석액 완충액, 고농도 샘플 희석에 사용

봉판막 투명, 미공판 밀봉에 사용

샘플 처리 및 저장

샘플 유형: 혈청, 혈장, 조직 균장, 세포 분해액, 세포 배양 상청 등.

처리 방법:

혈청/혈장: 실온 응고 후 원심(3000rpm, 10분), 청을 채취한다.

조직 균장: 생리식염수로 10% 균장액을 제조하여 원심에서 맑은 것을 취한다.

세포분해액: 분해 후 원심분리(15000rpm, 10분), 제거.

보존 조건: 단기 (≤ 7일) 2-8 ℃ 보존, 장기 (> 7일) 는 -20 ℃ 를 나누어 냉동 보관해야 하며, 반복적인 냉동 융해를 피해야 한다.

작업 단계

표준품 희석: 샘플 희석액으로 표준품을 순서대로 1000으로 희석한다pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.63 pg/mL，0 pg/mL공백을 대조하다.

샘플링: 구멍당 100 μL 표준품 또는 샘플을 넣고 37 ℃ 에서 90 분 동안 부화한다.

세탁: 구멍 안의 액체를 버리고 구멍마다 세제를 가득 넣고 30초 동안 가만히 둔 후 버리고 5회 반복하여 건진다.

바이오매스 표시 항체 추가: 구멍당 100 μL 바이오매스 표시 항체를 넣고 37 ℃ 로 60분 동안 부화한다.

가현색 바탕물: 구멍당 90 μL TMB 바탕물을 넣고 37 ℃ 의 빛을 피하여 15-30분 동안 부화한다.

종지반응: 구멍당 50μL의 종지액을 넣고 섞은 후 즉시 흡광도를 측정한다.

결과 계산

계기 설치: 효소 측정기 파장 450nm(파장 630nm 참조).

데이터 처리: 표준 제품 농도(pg/mL)는 가로 좌표, OD값은 세로 좌표로 표준 곡선을 그립니다.샘플 농도는 곡선 방정식을 통해 계산하고 희석 배수를 곱한다.

감도: 7.69 pg/mL, 검사 범위 15.62-1000 pg/mL.

주의사항

교차 반응: GPX1, GPX2, GPX3 등 유사물과 교차 반응을 일으키지 않는다.

작업 사양:

세탁은 액체가 남아 결과에 영향을 주지 않도록 깨끗해야 한다.

발색 시간을 15-30분으로 조절하여 과도한 발색으로 인한 데이터 편차를 방지합니다.

샘플은 단백질 분해를 방지하기 위해 반복적으로 얼지 않도록 한다.

품질 제어: 각 로트 실험마다 이중 구멍 재측정을 설정하는 것이 좋습니다. CV 값 <10% 는 합격입니다.

저장 조건

미개봉 시약함: 2-8 ℃ 피광 보존, 유효기간 6개월.

개봉 후: 표준품, 항체, 바탕물 등의 성분은 설명서의 요구에 따라 나누어 포장하여 보존하고, 반복적으로 얼지 않도록 한다.

이 설명서는 과학 연구 용도로만 사용되며 임상 진단에는 적용되지 않습니다.조작하기 전에 전체 설명서를 자세히 읽고 실험실 안전 규범을 준수하십시오.

주: 과학 연구에 사용되며, 이상의 자료는 참고로 제공됩니다.

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