인간 백혈구 매개체 22 (IL-22) ELISA 검사 키트 기술 설명서

BS-1649인 인터루킨22(IL-22) ELISA 키트

1. 제품 개요

이 시약함은 이중항체협심효소연면역흡착법(ELISA) 정량으로 사람의 혈청, 혈장 또는 세포배양상 청액 중 백혈구개소 22(IL-22)의 농도를 측정한다.IL-22는 활성화된 T세포, NK세포 등에서 분비되는 세포인자로 염증반응, 조직복원 및 면역조절에 중요한 역할을 한다.본 시약함은 민감도가 높고 특이성과 중복성이 좋은 특징을 가지고 있으며 과학연구실험과 임상검측에 적용된다.

2. 검측원리

가방 피항체: 항인 IL-22 단일 클론 항체 사전 가방은 마이크로 보드에 의해 샘플에서 IL-22와 결합하여 고체 복합체를 형성한다.

바이오매스 표기 항체: 바이오매스 표기의 항인 IL-22 항체를 첨가하여 IL-22와 결합하여 협심 구조를 형성한다.

효소 결합물: 매운 뿌리 과산화물 효소 (HRP) 표기된 스트렙토마이신 친화소를 첨가하여 바이오매스 특이성과 결합한다.

발색반응: 바탕물(TMB)을 넣어 발색하고 색상의 깊이와 옅음은 IL-22 농도와 정비례한다.

종료 및 측정: 종료액 종료 반응을 첨가하여 450nm 파장에서 흡광도 (OD값) 를 측정하고 표준 곡선을 통해 샘플 농도를 계산한다.

3. 시약함 구성

그룹 지정 수량

사전 패키지는 마이크로 슬레이트 96 / 슬레이트 1 개

표준품(동결건조)2ng/지2지

표준품 희석액 10mL 1병

바이오매스 마커 항체 6mL 1병

HRP 마커 스트렙토마이신 6mL 1병

세제(20×) 50mL 1병

발색제(TMB) 11mL 1병

종료액 (2M H₂SO₄) 6mL 1병

4. 견본요구

혈청/혈장: 채집 후 실온은 30분간 정치하고, 원심 (2000 × g, 15분) 에서 청을 취하고, -20 ℃ 또는 -80 ℃ 로 보존하며, 반복적으로 얼지 않도록 한다.

세포배양상청: 원심분리로 세포파편을 제거하고 즉시 검사하거나 분장하여 보존한다.

주의사항: 샘플에는 검측 결과에 영향을 주지 않도록 질소나트륨 (NaN) 이나 EDTA 등 방부제가 함유되어 있지 않도록 해야 한다.

5. 조작 절차

표준품 희석: 표준품 희석액으로 동결건조 표준품을 2ng/mL로 복용하여 배율로 희석 (예: 2ng/mL, 1ng/mL, 0.5ng/mL, 0.25ng/mL, 0.125ng/mL, 0.0625ng/mL), 0ng/mL 구멍을 공백으로 대조한다.

샘플링: 구멍당 100 μL 표준품 또는 샘플을 넣고 37 ℃ 에서 90 분 동안 부화한다.

세탁: 구멍 안의 액체를 버리고 세제로 판을 3회 씻어 1분씩 담가둔다.

바이오매스 표기 항체 첨가: 구멍당 100μL를 첨가하고 37 ℃ 로 60분 동안 부화한다.

효소 결합물 첨가: 구멍당 100 μL, 37 ℃ 를 넣고 30분 동안 부화한다.

발색과 종지: 구멍당 90μL TMB, 피광발색 15분, 50μL 종지액을 첨가한다.

측정: 450nm 파장에서 OD값을 읽고 표준 곡선을 그리고 샘플 농도를 계산합니다.

6. 결과 계산

표준 농도는 가로, OD값은 누진으로 표준 곡선을 그립니다.

샘플 OD값에 따라 표준 곡선에서 농도에 대응하고 희석 배수를 곱합니다 (샘플이 희석되지 않은 경우 1 곱하기).

ELISA Calc와 같은 전문 소프트웨어를 사용하여 곡선 맞춤 및 농도 계산을 수행하는 것이 좋습니다.

7. 성능 지표

감도: 0.015ng/mL로 제한됩니다.

정밀도: 배치 내 변이 계수(CV)<10%, 배치 간 CV<15%.

선형 범위: 0.0625-2ng/mL, 상관계수(R²)>0.99.

회수율: 고, 중, 저 농도 샘플에 대해 가표 회수를 진행하며, 회수율은 85~115% 사이이다.

특이성: IL-10, IL-17, IL-23 등 세포인자와 교차반응을 일으키지 않는다.

8. 주의사항

시약보존: 미개봉 시약함 2-8 ℃ 보존, 유효기간 12개월;개봉 후 표준품, 바이오매스 표기 항체, HRP 표기물은 분리하여 동존해야 하며, 반복적인 동융을 피해야 한다.

조작규범: 액체를 옮길 때 기포가 생기지 않도록 하고 세탁할 때 구멍내의 액체가 다 버려지는것을 확보한다.

안전방호: 종지액은 강산을 함유하고 조작할 때 장갑과 고글을 착용한다.

품질 관리: 각 배치 실험은 이중 구멍 재검사를 설정하고 OD값 예외 시에는 재검사를 수행합니다.

9. 흔히 볼 수 있는 문제 분석

문제 해결 가능성 원인 솔루션

표준 곡선 선형차 표준품 희석 오류 재배합 표준품, 배율 희석 확보

샘플 OD값 너무 높음 샘플 농도 검사 범위 초과 샘플 희석 후 재검사

발색이 너무 옅거나 미발색 효소 결합물 부활 검사 시약 유효기간, 새 시약 교체

세척 후 구멍 안에 잔류 액체가 있어 세척 횟수가 부족하거나 강도가 부족하여 세척 횟수를 증가시키고, 힘껏 구멍판을 두드린다

주: 이상은 참고용으로만 제공되며 본 시약은 과학연구에만 사용되며 실제수치로 삼지 않으며 실험은 설명을 엄격히 따르거나 기술선생님에게 자문해야 한다.

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