인혈관내피성장인자A(VEGF-A) ELISA 키트 실험사용설명서

BS-9809인 혈관내피성장인자A(VEGF-A) ELISA 키트

1. 제품 개요

이 시약함은 이중항체협심효소연면역흡착법(ELISA)을 적용해 사람의 혈청, 혈장, 조직균장, 세포배양상청 등 샘플에서 VEGF-A 농도를 측정하는 데 전용된다.과학 연구에만 사용하다.

2. 시약함 구성

사전 패키지는 마이크로 공판: 12공 × 8개 (96공 규격) 또는 12공 × 4개 (48공 규격) 이며, 사전 패키지는 VEGF-A에 저항하여 항체를 포획한다.

표준품: 동결건조분, 표준품 희석액을 재용한 후 배율 희석 (권장 농도 경도: 10, 3.33, 1.11, 0.37, 0.12, 0.04, 0 ng/mL).

검사 항체 - HRP: 매운 뿌리 과산화물 효소 표시의 항 VEGF-A 항체.

세척 완충액: 20 × 농축액, 증류수로 1: 20에 희석해야 한다.

베이스 용액: TMB 발색액 A/B, 사용 전 1:1 혼합, 15분 내 사용.

종지액: 2M 용액.

샘플 희석액: 고농도 샘플을 희석하는 데 쓰인다.

봉판막: 2장, 온육시 미공판 밀봉에 사용.

3. 실험원리

VEGF-A는 프리팩 포획 항체와 결합해'항체-항원'복합체를 형성한다.HRP 마커를 넣어 항체를 검사한 뒤'협심 구조'를 형성한다.세탁을 거쳐 미결합물질을 제거하고 TMB 바탕물질을 넣어 발색(파란색)하고 종료액이 반응을 종료하면 노란색으로 변한다.450nm 파장은 흡광도(OD값)를 측정하며 농도는 OD값과 정비례한다.

4. 실험절차

샘플 준비

혈청/혈장: 원심분리로 미세먼지를 제거하고 용혈을 피한다.2-8 ℃ 보존≤48시간, 장기 보존은 -20 ℃/-80 ℃ (반복적으로 얼지 않음) 가 필요하다.

세포상청: 원심에서 청을 취하고 고농도 단백질효소제를 함유하지 않도록 한다.

시약 준비

세척액: 농축 세척액 실온 결정 시, 40 ℃ 의 수욕 용해 후 1: 20에 희석한다.

표준품: 재용해 후 배율 희석, 현재 배합 현용.

바탕물: TMB A/B 액체 1:1 혼합, 피광 보존.

운영 프로세스

샘플링: 구멍당 100 μL 표준품/샘플을 첨가하고 37 ℃ 에서 90분 동안 부화한다.

세탁: 구멍 안의 액체를 털어내고 세제에 1분/회 담그고 3회 반복한다.

검사 항체 추가: 구멍당 100 μL HRP 표시 항체를 넣고 37 ℃ 에서 60 분 동안 부화한다.

세탁: 동기 급2.

발색: 구멍당 90 μL TMB 바탕물을 넣고 37 ℃ 의 빛을 피하여 15-20분 동안 부화한다.

종료: 구멍당 100μL의 종료액을 넣고 섞은 후 30분 이내에 OD값을 측정한다.

결과 계산

표준 농도(ng/mL)는 가로, OD값은 누진으로 표준 커브를 그립니다.

샘플 OD값에 따라 곡선을 대입하여 농도를 계산하고 희석배수를 곱한 결과.

5. 주의사항

시약보존: 시약함을 사용하지 않으면 2-8 ℃ 의 피광보존이 필요하며 유효기간은 6개월이다.복용 표준품은 분장하여 보관할 수 있으며, 반복적으로 얼지 않도록 한다.

샘플 처리: 함유된 샘플의 사용을 피하고 HRP의 활성을 방지합니다.

조작규범: 액체를 옮기는 수요, 기포를 피한다;세탁 수요, 교차 오염 방지.

안전 보호: 액체 함유 강산을 종료하려면 장갑을 끼고 조작해야 한다.

6. 예상 결과

감도: ≤ 1.54 pg/mL (실제 설명서 기준).

검사 범위: 일반적인 범위는 3.12-200 pg/mL이며 일부 키트는 62.5-2000 pg/mL로 확장됩니다.

반복성: 판내/판간 변이 계수는 각각 <10% 와 <15% 이다.

7. 자주 묻는 질문과 대답

Q: 발색이 너무 옅거나 깊은가?

A: 샘플의 희석 배수 또는 부화 시간을 조정한다;바탕의 신선한 조제를 확보하다.

Q": 표준 곡선의 선형이 낮습니까?

A: 재용해 조작을 검사하여 기포를 피한다;이액기 흡입기를 교체하다.

주: 이상은 참고용으로만 제공되며 본 제품은 과학연구에만 사용되며 실제수치로 삼지 않으며 실험은 설명을 엄격히 따르거나 기술선생님에게 자문해야 한다.

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