세포 계수 방법：계수판에서 전자동 세포 계수기까지

많은 일반적인 실험과 검사는 과학자들이 먼저 세포의 수나 밀도를 정확하게 계산해야 한다.이러한 작업에는 세포 대물림과 같은 간단한 세포 배양 유지 보수 및 qPCR과 같은 정량 실험이 포함됩니다.세포 계수는 여러 가지 방법으로 완성할 수 있으며, 본고는 이러한 방법과 그 장단점을 전면적으로 소개할 것이다.

1 계수판/혈구카운트그릇

혈구 사용카운트그릇먼저 70% 알코올 및 렌즈 용지로 청소카운트그릇그런 다음 커버 볼륨을 카운터 보드에 살짝 놓습니다.덮개 볼륨을 올바르게 배치하면 뉴턴 루프 현상 (동심 루프 모양의 컬러 패턴) 을 관찰할 수 있습니다.이액기로 일부분의 세포현액을 취하여 계수판 가장자리에 이액기를 놓아 현액이 모세작용을 통해 계수실로 유입되도록 한다.세포 활성을 검사해야 한다면 계수실에 넣기 전에 대망람을 1:1 비율로 세포 현액에 섞어야 한다.

혈구카운트그릇초기에 정확한 세포 계수를 얻는 데 전문적으로 사용된 방법으로, 계수판에 특수한 격자가 있다.일반적으로 큰 사각형은 1mm × 1mm이며 0.05mm × 0.05mm의 작은 칸으로 더 나뉩니다.카운터실의 가장자리는 마커 격자 위 0.1mm에 캡 볼륨을 고정하여 알려진 볼륨의 영역을 형성하도록 설계되었습니다.

현미경이 계수실의 한 영역에 초점을 맞춘 후계수기세포를 계수하다.일반적으로 1 제곱 밀리미터 (100 나노리터) 의 영역을 사용하고 4 배 또는 10 배의 물안경 수를 사용하지만 구체적인 선택은 세포 크기와 현액 중 밀도에 달려 있습니다.이 절차는 일반적으로 네 개의 다른 1제곱밀리미터 영역에서 반복되며 결과는 평균입니다.세포의 활성을 검사하면 살아있는 세포와 죽은 세포를 각각 계산해야 하는데, 그 중 막이 손상되어 죽은 세포는 대망람에 의해 파란색으로 염색된다.

그림 1 혈액세포계수판 격자 설명도

장단점

수동으로 계산하는 것은 예산을 절약하는 방법이지만 가장 시간이 많이 걸리고 번거롭다.인위적인 오차 때문에, 특히 연속적으로 여러 번 계수할 때 신뢰성이 낮다.또 잦은 계수는 눈의 피로를 초래할 수도 있다.실험실에서 간혹 계수만 하고 고정밀도가 필요하지 않다면 혈구계수기좋은 선택이야.그러나 빈번한 계수, 정밀도 향상 또는 높은 통화량 적용이 필요할 때는 이 방법이 부족해 보입니다.이밖에 수동계수는 현액중의 부동한 류형의 세포를 구분하기 어려우며 세포류형이 크기나 형상에 뚜렷한 차이가 없는 한 구분하기 어렵다.

2 자동세포계수기

자동세포계수기수동 카운트의 빠르고 간편하며 자동화된 대안입니다.그것들은 혈액 세포와계수기동일한 원리로 알려진 영역 내에서 세포를 여러 번 계산하고 평균을 취하여 작업을 완료합니다.이들 장비도 대망람 등 염료 배제법을 통해 살아있는 세포와 죽은 세포를 구분할 수 있다.자동세포계수기독립형 장치이거나 컴퓨터에 연결하여 사용할 수 있습니다.대다수계수기세포 계수 외에 세포 크기 등의 정보도 집계할 수 있다.

형광세포 계수의(예: Luna-FL™ 이중 형광 세포 계수의) 살아있는 세포와 죽은 세포를 구분하고 흔히 볼 수 있는 염색약(예를 들어 아디딘 오렌지와 요오드화 피리딘)을 사용하여 세포 계수를 한다.이런 유형의 세포 계수의염료가 세포를 명확하게 구분할 수 있기 때문에 비세포 파편 (예: 원래 세포) 에 오염될 수 있는 배양물 중의 세포를 계수하는 데도 뛰어나다.

장단점

자동계수기적합일반의 세포 계수와 활성 검사.그것은 조작이 간단하고 원가가 비교적 낮아 수동으로 계산하는 노동량을 크게 감소시켰다.자동계수기정확하고 신뢰할 수 있지만 모양이 불규칙하고 매우 작으며 현액이 매우 희박하거나 구분해야 할 여러 세포가 포함되어 있을 때 도전이 있을 수 있습니다.대부분의 세포 유형 및 응용 프로그램에 대해 자동계수기효율적인 카운트 성능을 제공합니다.

3 Coulter는계수기

Coulter는계수기광학 기기가 아니라 마이크로 채널의 저항 변화를 측정하여 세포를 계산합니다.세포의 저항은 현액 전해질 용액보다 높으며, 세포가 통로를 통과할 때 일시적으로 저항이 증가하는데, 이 변화는 세포의 크기가 증가함에 따라 커진다.Coulter계수기의 작업은 자동계수기그러나 사용하기 전에 공백 테스트를 실행하고 사용 후 장치를 현상해야 합니다.

장단점

쿠르트계수기속도가 빠르고 크기가 다른 세포를 정확하게 계산할 수 있기 때문에 병원의 혈구 계수에 자주 사용된다.그러나 살아있는 세포와 죽은 세포를 구분할 수도 없고, 덩어리를 형성하는 세포를 정확하게 셀 수도 없다.또한 유지 관리 요구 사항이 높습니다.

4 유식세포계

일반적으로 더 상세한 세포 분석에 사용되는 스트리밍 세포 미터는 표시된 세포 내 성분을 감지 할 수있는 형광 검사 기술을 갖추고 있습니다.모든 유식세포계가 세포계수를 할수 있는것은 아니지만 체적측정기능을 갖춘 유식세포계는 고도의 정확한 세포계수를 제공할수 있으며 형광표기의 항체를 통해 세포류형을 구분할수 있다.

장단점

스트리밍 세포 계수는 강력하지만 일반적으로 $40000 ~ $100000 이상으로 가격이 비싸기 때문에 일반적인 세포 계수에는 거의 사용되지 않습니다.

5 기타 세포 계수 방법

스펙트럼 측정은 간혹 세포밀을 추산하는 데 쓰인다도.세포가 혼탁하기 때문에 세포 밀도가 높아지면서 비색 그릇을 통과하는 빛이 줄어든다.그러나 분광기는 세포를 직접 계수하지 않고 흡광도만 측정하며 현액중의 기타 변수가 흡광도에 영향을 줄수 있기에 이런 방법은 믿음직하지 못하다.

배양법은 또 다른 계수 방법으로 균락을 형성하는 세포(예를 들어 세균)에만 적용된다.세포현액은 희석하여 배양그릇에 선을 그은 후 균락수를 계수하여 원시현액의 세포밀도를 계산한다.그러나 균락이 자라기를 기다려야 하기 때문에 배양법이 가장 느린 방법이다.

자동 세포 계수기: 더 정확한 계수가 더 우수한 과학을 가져온다

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