활용 포인트 구성LUNA-FX7™자동 세포 계수기 정자 세포 평가 최적화

키워드: 자동 세포 계수기, 이미지 기반 정자 세포 평가, 세포 계수, 생존율 평가, 이중 염색

1 머리말

정자세포 평가(일명 정액분석)는 남성의 출산 잠재력을 판단하는 데 중요한 역할을 한다.출산능력을 직접 측정하는 지표는 아니지만 남성의 출산능력은 인간의 출산과 축산업 육종에 모두 중요한 영향을 미치기 때문에 정자세포 평가가 주목받고 있다.

현재는 스트리밍 세포술과 이미지 기반 분석 도구를 통해 정자세포 평가를 할 수 있다.LUNA-FX7로 설정™자동세포계수기 등 자동화설비는 영상을 리용하여 정자견본을 빠르고 편리하게 분석할수 있다.그러나 정자세포는 포유동물 세포의 형태와 특성에 비해 독특하기 때문에 분석 파라미터를 최적화하고 적합한 염료를 선택해야 한다.

본 연구는 SYBR14, 아디딘 오렌지(AO)와 요오드화 프로피딘(PI) 등 형광 염료를 비교 분석하여 LUNA-FX7로 최적화하였다.™정자세포에 대한 평가 능력.이 연구는 다양한 염료 조합의 유효성을 평가하고 정자 세포 평가의 매개 변수 설정을 최적화하기 위해 고안되었습니다.

2 방법 및 재료

2.1 샘플 제조

소의 냉동 정액 샘플을 해동하고 완충액을 PBS로 대체합니다.샘플 상태에 따라 정액 샘플을 PBS에 약 1: 20 ~ 1: 40의 비율로 희석합니다.

2.2 형광 염색

1. 혼합:

18 μL PBS의 정자 세포

2μL 혼합된 녹색과 적색 형광 염료

2.37℃에서 10분간 부화

3. 샘플을 적당한 적재 볼륨에 로드

4. LUNA-FX7로 포인트 사용™분석 수행

표1. LUNA-FX7로 표시™고급 모드에서 정자세포 평가의 최적화 매개 변수 설정

3 정자세포 평가의 세포 계수 방안과 염료 조합을 최적화하다

요약: SYBR14/PI와 AO/PI 이중 염색은 모두 정자 활력 평가에 적용되지만 SYBR14/PI는 더 우수하다.

LUNA-FX7로 설정™의 기본 프로토콜은 일반적인 포유류 세포에 최적화되었지만 정자 세포 평가는 노출 수준, 세포 크기 및 결합 제거 감도 등의 매개 변수를 조정해야합니다.예를 들어, 최소 검색 크기를 3µm에서 7µm로 조정하고 클러스터링 감도를 5에서 7로 조정하여 테스트 성능을 향상시킵니다(표 1).또한 SYBR14/PI와 AO/PI 염색의 노출 수준은 각각 GF 6과 RF 9로 설정됐다.

이를 바탕으로 SYBR14/PI와 AO/PI 염색 방법을 비교 분석했다.정자세포 평가에서 SYBR14/PI 염색법의 알려진 유효성을 감안하여 AO/PI 염색법의 발현에 주목합니다.두 염색법 모두 정자세포 평가에 활용할 수 있다는 연구결과가 나왔다(그림 1).그러나 SYBR14는 정자세포 염색에서 AO보다 적합하며, SYBR14의 화학적 특성이이 응용에 더 적합할 수 있음을 나타냅니다.

그림 1. 두 가지 다른 염료(SYBR14/PI와 AO/PI)로 염색한 정자세포의 형광 이미지.이 조합 이미지는 분석된 명장, 녹색 빛, 빨간색 빛, 태그 이미지를 보여줍니다.마커 이미지는 빨간색 원은 죽은 세포를, 녹색 원은 살아있는 세포를 나타내는 복합 형광 채널 이미지입니다.

4 결론

이 연구에서는 SYBR14/PI와 AO/PI 염색법이 모두 정자세포의 생존율을 평가하는 데 사용될 수 있지만 SYBR14/PI가 더 우수한 것으로 나타났다.또한 노출 수준 및 기타 매개변수의 조정은 전체 검사 성능에 매우 중요합니다.LUNA-FX7로 눌러도™정자 샘플에 특별히 최적화된 것은 아니지만, 추천된 샘플 희석 비율과 영상 조건 최적화를 통해 여전히 빠르고 편리한 정자 세포 평가 방안을 제공할 수 있다.