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분자 형광 분광기 규범의 조작 절차를 약술하다.
날짜:2025-08-21읽기 :0
화학, 생물, 재료 및 의약 연구 분야에서 분자 형광 분광기는 물질의 미시적 발광 특성을 밝히는 탐침으로서 샘플을 자극하여 형광을 생성하고, 그 발사 스펙트럼, 자극 스펙트럼, 형광 강도 및 수명 등 파라미터를 측정하여 단백질 구조 분석, DNA 검측, 형광 탐침 개발과 환경 오염물 식별에 널리 응용된다.분자형광 분광기는 높은 감도 (ppb급에 도달할 수 있음) 와 선택성으로 현대 실험실의 선택이 되었다.데이터가 정확하고 기기가 안정되도록 하기 위해서는 과학적이고 규범화된 조작 절차를 따라야 한다.
1단계: 환경 준비 및 계측 예열
실험실 환경이 청결하고 빛을 피하며 온도가 안정되도록 (20-25 ℃) 하여 강진동과 전자기 간섭을 피한다.기기의 전원을 켜고 광원 (제논 또는 레이저), 본체 및 냉각 시스템 (필요한 경우) 을 차례로 가동합니다.30분간 예열하여 광원의 출력을 안정시키고 탐측기의 온도를 일정하게 하며 기선의 표류를 피면한다.
2단계: 샘플 제조 및 샘플링
테스트 수요에 따라 적당한 농도의 용액 샘플을 조제하여 농도가 너무 높아"자체 흡수"또는"형광 급멸"을 초래하지 않도록 한다.깨끗한 석영 비색 그릇(유리는 자외선 흡수가 강하여 적용되지 않음)을 사용하여 그릇 높이의 2/3-3/4에 액체를 주입한다.그릇벽의 지문과 액체를 닦고 비색그릇의 표기선을 광로방향에 맞추어 견본창고에 가볍게 놓아 광학면에 긁히지 않도록 해야 한다.
3단계: 매개변수 설정 및 모드 선택
제어 소프트웨어를 통한 테스트 모드 설정:
발사 스펙트럼: 고정 자극 파장, 스캔 발사 파장 범위;
자극 스펙트럼: 고정 발사 파장, 스캔 자극 파장;
정량 분석: 고정 자극/발사 파장을 설정하고 형광 강도를 측정한다.
좁은 틈의 폭 (해상도와 감도에 영향을 미침), 적분 시간, 스캔 속도 등의 매개변수를 설정하여 노이즈 비율과 테스트 효율의 균형을 맞춥니다.
4단계: 배경 보정 및 베이스라인 스캔
먼저 공백용제 (예를 들면 이온제거수, 에탄올) 비색그릇을 넣고"배경공제"나"기선교정"을 집행하여 용제 라만산란과 계기본저신호를 제거한다.이 단계는 저형광 강도 샘플에 특히 중요합니다.
5단계: 샘플 측정 및 데이터 수집
테스트 대기 샘플로 교체하고 스캔을 시작합니다.실시간 스펙트럼 곡선을 관찰해 이상봉이나 소음이 없음을 확인한다.주요 샘플을 반복적으로 스캔하여 재현성을 검증할 수 있습니다.형광 수명 측정을 수행하려면 시간 관련 단일 광자 계수(TCSPC) 모드로 전환하여 펄스 광원과 고속 탐지기를 사용해야 합니다.
6단계: 데이터 보존 및 기기 재설정
테스트가 완료되면 지정된 경로에 데이터를 저장하여.csv,.txt와 같은 일반 형식으로 내보냅니다.샘플을 꺼내 용제로 비색 그릇을 씻어 말린다.광원 (특히 제논 램프는 자주 켜지지 않음), 호스트 및 소프트웨어를 끕니다.장기간 사용하지 않을 때는 방진 덮개를 덮어라.