토루 니시카와팀 발표《International College of Dentistry의 저널》의 연구요소보균소를 통해 (STZ는) 당뇨병 쥐 모델 구축을 유도하고, 이 모델에서 실험성 치주염을 유도하여 일산화질소(아니요) 경로는 다음과 같습니다.중점, 당뇨병 상태에서 치주병이 악화되는 메커니즘을 탐구하고, 잇몸의 혈류, 염증 관련 유전자(종양 괴사인자를 중점적으로 분석한다α/TNF α유도형 일산화질소 효소/ iNOS) 표현 및 아질기 스트레스 표지물 (니트로카제인) 의 변화.

요약

〈목적〉은 당뇨병 상태에서 치주병이 악화되는 메커니즘을 명확히 하기 위해 본 연구는 요소보균소(STZ는) 는 당뇨병 쥐 모델을 만들어 실험성 치주염을 유도하고 일산화질소(아니요) 경로는 다음과 같습니다.중점탐구를 전개하다.

재료 및 방법 5 주령 의 수컷SD는쥐, 복강 주사로STZ는（60mg/kg) 당뇨병을 유도한다.STZ는주사2 주 후 위턱 오른쪽 두 번째 어금니 (M2는)의 치경부 결찰 나일론 선 (3-0 수르질론) 실험성 치주염을 유도하기 위해 이 측을 실험측으로 한다.반대쪽은 대조적으로 처리되지 않습니다.실험성 치주염 유도2 주 후에는 잇몸 조직의 혈류를 측정한 뒤 쥐를 처형하고 잇몸 조직에 대한 유전자 발현 분석 및 조직학 검사를 한다.

<결과> 당뇨병 쥐 대조측의 잇몸 혈류는 정상 쥐 대조측보다 현저히 낮다;정상적인 쥐든 당뇨병 쥐든 치주염이 유도된 후 잇몸 조직의 혈류는 각자 대조측보다 현저하게 증가했다.유전자 발현 분석 결과 정상 쥐 중 치주염 유도 후TNF-α유전자 발현은 증가 추세지만 통계학적 차이는 없다.iNOS는유전자 발현이 현저하게 증가한다.당뇨병 쥐 중 치주염 유도 후TNF-α와iNOS는유전자 발현이 모두 현저하게 증가하다.조직학 검사에 따르면 정상 쥐의 치주염 유도 부위는 가벼운 염증 세포 침윤만 보였고 당뇨병 쥐는 이 부위에서 뚜렷한 염증 세포 침윤을 볼 수 있었다.잇몸 조직에서 니트로카제인의 발현을 더 분석한 결과, 정상적인 쥐의 치주염 유도 부위에는 니트로카제인 양성 세포가 보이지만, 당뇨병 쥐는 치주염 유도 후 니트로카제인 양성 세포의 수가 현저하게 증가했다.

[결론] 본 연구는 당뇨병 쥐 실험 측 잇몸 조직에서 니트로카제인 양성 세포의 수가 현저하게 증가하여 당뇨병이 치주병을 합병하는 과정에서 아질기가 중요한 역할을 발휘해야 한다는 것을 제시하였다.이와 함께 아질기 스트레스 억제가 당뇨병 관련 치주염의 치료 전략 중 하나가 될 수 있다고 제시했다.

실험재료 및 기기

(1) 실험재료

1. 실험동물:5 주령 의 수컷SD는다람쥐

2. 당뇨병 유도제: 우레탄 보균소(STZ는）；치주병 유도재료: 나일론 봉합사(3-0 수르질론）；마취제: (펜토바르비탈）

(2) 실험기기

1. Omegawave는 FLO-N1은레이저 도플러 혈류계, 잇몸 조직 혈류 측정에 사용

Omegawave는 FLO-N1은레이저 도플러 혈류계

잇몸 조직 중의 혈류치

2. 실시간 형광 정량PCR는기기: 유전자 표현 정량 분석

3. 광학 현미경: 조직 절편 염색 후의 관찰 및 세포 계수에 사용

4. 저온 저장 장치: 액체 질소 탱크 (조직 급속 냉동용),-80℃냉장고 (조직 장기 보존용)

5. 가열 매트: 잇몸의 혈류를 측정할 때 쥐의 직장 온도를37℃

실험 과정

(1) 실험동물 사육과 당뇨병 모델 구축

1. 모든SD는다람쥐는 항온에서 사육한다 (23±1.0℃), 항습(45±10%)의 동물실, 사용12 시간 명암 교대 주기로 자동 급수 장치를 통해 수돗물을 공급한다.

2. 쥐 복강 에 주사 를 놓다STZ는（60mg/kg) 당뇨병을 유도한다.STZ는주사1 주후에 쥐의 혈당치를 측정하여 혈당을≥200mg/dL의 쥐는 당뇨병 모델 쥐로 판정되어 후속 실험에 포함되었다.

(2) 실험성 치주염 유도

STZ는주사2 주 후에 모든 쥐에게+당뇨병 쥐) 처리: (0.5mg/kg, 복강 주사) 마취 하에, 위턱 오른쪽 두 번째 어금니 (M2는) 치아 목 부분에 나일론 봉합사 (3-0 수르질론), 잇몸 손상을 최소화하고 명치 뚜껑에 매듭을 지어 고정합니다 (이 쪽은 실험 쪽).위턱 왼쪽 두 번째 어금니는 처리하지 않습니다 (대조측).

(3) 잇몸 조직의 혈류 측정

1. 치주염 유도 후 복강 주사(0.5mg/kg) 쥐를 마취시키고 레이저 도플러 혈류계(FLO-N1은) 프로브가 실험 및 대조 측면에 고정됨M2는의 볼 옆 잇몸 바로 위.

2. 측정 중에 다람쥐를25℃패드를 가열하여 직장 온도를 유지하다.37℃, 혈류치 기록 (단위:ml/min/100g 조직）。

(4) 채집과 처리를 조직한다

1. 실험성 치주염 유도 2 주 후, 복강 주사를 통해 (1.5mg/kg쥐를 처형하다.

2. 채집 실험 측면과 대조 측면M2는뺨 옆 잇몸 조직: 일부는 즉시 액체 질소를 넣고 빠르게 냉동한 후- 80℃냉장고 보존(유전자 발현 분석용);다른 부분은 양쪽 위턱 조직과 함께 떼어내10%포르말린 용액 고정24 시간 (조직학 분석용).

(5) 유전자 표현 분석

1. 사용TRIzol 시약냉동 잇몸 조직에서 총 추출RNA는, 다시 합계RNA는템플릿, 사용슈퍼스크립트RNase H-Reverse Transcriptase작성cDNA는。

2. 채택TaqMan 유니버설 PCR 마스터 TaTaqMan Universal PCR Master Mix와TaqMan은프로브ABI 프리즈마 7000계기에서 진행하다PCR는반응, 반응 조건은95℃ 1분,52℃ 1분,72℃ 30초, 총40 개의 순환.

3. 로GAPDH는내삼 유전자를 위해 채택하다ΔΔCt는법계산TNF-α와iNOS는유전자의 상대적 발현량.

실험 결론

본 연구는 당뇨병 쥐 실험 측 잇몸 조직에서 니트로카제인 양성 세포의 수가 현저하게 증가하여 당뇨병이 치주병을 합병하는 과정에서 아질기가 중요한 역할을 발휘해야 한다는 것을 제시하였다.이와 함께 아질기 스트레스 억제가 당뇨병 관련 치주염의 치료 전략 중 하나가 될 수 있다고 제시했다.