2025년9월, 교토대학교 의학대학원 피부과 등 여러 기관에서 온나오미 키타야마연구팀, 에서생화학 및 생물리학 연구 통신정기간행물에 제목을 발표하였다."아토픽 피부염에서 PAR-2를 표적화: 새로운 억제제 E6795의 임상 전 평가"의 연구.이 연구는 아토피 피부염 (AD)의 병리 메커니즘, 새로운 단백질 효소에 대한 수용체 활성화2（PAR-2는) 소분자 억제제E6795는임상 전 평가를 실시하여 개선되고 있음을 탐구하였다.AD관련 염증, 가려움 및 피부 장벽 기능 장애 등의 작용.

요약

아토피성 피부염(AD)는 습진 피부손상, 심한 가려움증, 피부 장벽 기능 손상이 특징인 만성 염증성 피부병이다.비록 신형의 치료방법이 끊임없이 용솟음쳐나오고있지만 많은 환자들은 여전히 질병통제가 부족하고 치료원가가 높으며 병세가 재발하는 등 문제에 직면하고있다.단백질 효소는 수용체를 활성화시킨다2（PAR-2는) 에서AD피부 손상 중 과도한 표현은 염증 반응, 가려움증 발생 및 표피 안정 불균형을 촉진하는 데 작용한다.본 연구는E6795는임상 전 연구 증거에 따르면, 이 화합물은 상술한 병리 과정을 표적으로 설계된 소분자이다PAR-2는억제제.효소와 약리학 분석에 의하면E6795는선택적 억제PAR-2는, 광범위한 효소와 약리학 검사 패널에서 매우 낮은 표적 이탈 상호 작용을 보여줍니다.또한E6795는두 생쥐 모델에서 모두 개선되었습니다.AD염증 반응 경감과 면역세포 침윤을 포함한 관련 종점 지표;경구용 주사약은 경표피의 수분 유실을 낮춘다 (TEWL은), 그리고2%국소 연고제는 장벽 기능과 관련된 조직학적 표현 및 가려움 증상을 개선했다.조직학 검사 확인,E6795는치료 후 염증 세포의 침윤이 감소하고 피부 장벽 기능이 강화된다.연구 결과에 따르면,E6795는선택적 억제를 통해PAR-2는신호 전도, 표적 방향 작용AD병리 생리학 의 3대 지주——장벽 기능 장애, 염증 반응, 가려움증.본 연구는E6795는비용 효율적인 신형AD국소 치료제의 잠재력.

실험재료 및 기기

(1) 실험재료

1. 실험동물:11-12주령 의 수컷Nc / Nga쥐새끼,6-14주령 암컷BALB/c는쥐새끼,6-10주령 의 수컷C57BL/6J는쥐새끼.

2. 시약 및 항체:MC903는、E6795는、PAR-2는흥분 펩타이드SLIGKV-NH8322ndle；화SLIGRL-NH₂, 인슐린, 혈액 응고 효소, 카르복실 메틸 섬유소, 디메틸 타미플루, 우라탄, 다양한 형광 마커 항체,FLIPR는칼슘 측정 시약, 콜라겐 효소II유형,DNase I는、10%포르말린, 소목정-이홍 염색 시약, 아닐린 블루 염색 시약 등.

3. 세포 및 조직 샘플: 인간 배아 신장HEK293세포, 건강한 사람의 피부 샘플,AD환자의 피부 손상 샘플.

(2) 실험기기

FDSS6000은형광 검사 시스템,FACS Fortessa는유동식 세포계,FlowJo는소프트웨어, 두께계, 스크래치 측정 시스템,384구멍 폴리프로필렌 시약 저장판,I타입 콜라겐 백은 투명 베이스 블랙384대시보드, 환기 케이지, 현미경 및 이미지 분석 시스템,ASCH는기화 스캐닝경피 수분 유실 측정기

ASCH VAPOSCAN은경피 수분 유실 측정기

실험 과정

1. 세포 실험:HEK293세포가 함유되어 있다3%태소의 혈청의DMEM은배양기 중 배양, 접종384슬롯 후면 로드FLIPR는칼슘 측정 시약, 농도별 첨가E6795는사전 처리30분, 인슐린 또는 혈액 응고 효소를 추가, 통과FDSS6000은시스템 모니터링120초 내 실시간 형광 강도, 4개 파라미터 사용물류모델 계산IC₅₀값.

2. 동물 모델 구축 및 약물 공급:

￮MC903는유도AD모델:BALB/c는쥐 귀 연속8천국부 도포MC903는, 부터4매일 매일 입에 물고E6795는의 카르복실메틸셀룰로오스 혼현액은 대조조조에 상응한 용매를 준다.

￮Nc / Nga심각AD모델: 피부염이 있는Nc / Nga생쥐는5그룹, 매일 부분 도포E6795는크림, 지속7일, 생물학적 대조로 미처리조를 설정하다.

3. 약효학 평가:

피부 장벽 기능: 통과ASCH는기화 스캐닝경피 수분 유실 측정기측정제0、3、7하늘의 경표피 수분 유실값（TEWL은）；두께계를 사용하여 매일 쥐의 귀 두께를 측정한다.

ASCH VAPOSCAN은경피 수분 유실 측정기

（c）第3 하늘과 제7 하늘의 경 표피 실수량 (TEWL은) 검사 결과입니다.용매 대조 그룹에 비해E6795는경구용 약물 은 제 1 에 있다7 하늘은 현저히 낮아질 수 있다TEWL은. 데이터는 평균값 ± 표준 오류로 표시됩니다 (제외8 천구복급약조n=3외 나머지 그룹n=4）。* 교정 후P < 0.05, 용매 대조군과 비교(던넷 검사)

￮가려움 행동 검사: 제7하늘17:00다음 날까지07:00, 쥐를 측정 케이지에 단독으로 넣고,2시간 적응 후 스크래치 측정 시스템을 통해 기록12시간 내 긁는 행위의 빈도.

￮조직학 및 면역 조화 분석: 실험 종점에서 쥐의 귀 피부 조직을 수집하여 포름알데히드 고정, 파라핀 파묻기 후 제작5μm슬라이스, 진행H&E는염색(염증세포 침윤과 표피 두께 관찰), 메타민 블루 염색(계수비대세포) 및PAR-2는면역 조화 염색;사람의 피부 샘플도 똑같이 진행됩니다.PAR-2는면역 조직화 검사.

￮유식세포술분석: 쥐의 귀피부조직은 효소분해를 거쳐 단세포현액을 제조하고 형광표기항체로 염색한후 통과한다FACS Fortessa는기산성 입자세포, 중성 입자세포,CD4⁺T세포, 알칼리성 입자세포 등 면역세포 아군의 침윤 상태를 제곱mm당 귀 피부의 절대 세포 수로 표시했다.

4. 약대동력학연구: 쥐체내 검측E6795는의 혈장 유리 분수, 전혈 유리 분수 및 피-펄프비, 전신 흡수와 분포 특징을 평가한다.

5. 선택적 분석: 효소 선택적 패널과CEREP는약리학 결합 패널, 검사1μM화10μM농도하E6795는다양한 효소, 수체, 이온 통로의 억제 작용에 대해 과녁 이탈 활성을 평가한다.

6. 통계학적 분석: 사용그래프패드 프리즈마 7.03소프트웨어, 단일 요소 분산 분석 사용(단방향 ANOVA) 결합더넷은다중 비교 검사α=0.05검사 수준을 위해 데이터는 평균값으로 한다±표준 오류 (평균±SEM) 표현입니다.

실험 결론

1. E6795는강력하고 선택적인PAR-2는활성 억제, 세포 칼슘 통량 측정 중IC₅₀값은6.56nM의네, 맞아요PAR-1은억제 작용이 없고 광범위한 효소와 약리학 패널에서 과녁을 벗어나는 활성도가 매우 낮다.

2. 약대동력학 디스플레이E6795는경구 복용은 흡수할 수 있는데, 비록 혈장 단백질의 결합률이 매우 높지만97.5%그러나 소량의 유리약물은 치료작용을 발휘할수 있다.

3. 면역 조직화 실증AD환자 각질 형성 세포 중PAR-2는표현이 건강한 사람보다 높아진다.

4. 에서MC903는유도적AD쥐 모형에서,E6795는경구 복용과 국부 투여 모두 기산성 입자 세포의 침윤을 감소시킬 수 있으며, 경구 투여 약은 감소시킬 수 있다TEWL은피부 장벽 기능을 개선하고 국부적으로 약을 주면 귀 두께를 줄일 수 있다.

5. 에서Nc / Nga AD는쥐 모형에서,2 % E6795크림은 표피의 두께, 비대세포의 침윤 및 긁는 행위를 감소시켜 피부염 관련 조직학적 표현을 개선한다.

6. E6795는선택적 억제를 통해PAR-2는신호, 표적 방향AD병리생리학의 3대 핵심 (염증, 가려움증, 장벽기능장애) 은 원가효익이 높고 미세한 국부치료약물로서의 잠재력을 갖고있다.