1. 항아리에 오르기 전의 준비
1. 세포현액제조: 미리 배양한 세포를 요병이나 배양접시에서 수집하여 혼합한후 1mL를 취하여 세포계수를 진행하여 접종밀도가 적합하도록 확보한다.
2. 설비 멸균: 반응기 탱크, 파이프 및 전극이 이미 멸균되었는지 검사 (예: 121 ℃ 고압 증기 처리), 미생물 오염을 피한다.
3. 배양기와 완충액: 충분한 배양기를 준비하고 pH를 목표 범위 (예: 7.2-7.4) 로 미리 조정하여 멸균 후 냉각하여 준비한다.
2. 접종과 초기 배양
1. 무균 조작: 생물 안전 캐비닛에서 세포 현액을 무균 파이프를 통해 반응기 안으로 옮기고, 동시에 압축 공기를 통해 보조 혼합을 보조한다.
2. 매개변수 설정:
온도: 포유동물 세포는 보통 37 ℃ 로 설정된다.
용산소(DO): 처음에는 40%로 설정하고 기체 혼합(O₂/N₂/CO₂)을 통해 안정을 유지한다.
pH 제어: 연동 펌프를 사용하여 산/염기를 보충하거나 CO₂ 조절을 통해 pH를 6.5-7.0 (시세포 유형 조정) 으로 유지한다.
3. 배양과정 모니터링
1. 정기적인 샘플링: 24시간마다 온라인으로 샘플링하여 세포밀도, pH 및 대사물 (예: 포도당, 젖산) 농도를 측정한다.
2. 류가보료: 영양소모상황에 따라 농축배지 또는 특정성분 (예: 아미노산) 을 류가하여 세포대수생장기를 연장한다.
3. 절단력 제어: 저회전 속도 믹서 (예: 50-100rpm) 또는 파도식 반응기를 사용하여 기계 손상을 피한다.
4. 수확과 세척
1. 배양 종료: 세포가 쇠망기에 접어들거나 산물 축적이 최고치에 달할 때 자동 제어 시스템을 폐쇄한다.
2. 배액과 수집: 압축공기를 통해 배양액을 폐액통에 배출하고 세포와 상청액을 분리한다.
3. 세척 멸균: 순화수로 탱크 및 부품을 씻고, 0.1M 수산화나트륨을 물에 담가 밤을 새워 잔류가 없도록 한다.
5. 주의사항
1. 무균 조작: 전 과정은 오염을 엄격히 피해야 하며, 조작 전에 장갑과 도구를 소독해야 한다.
2. 매개변수 교정: 정기적으로 pH, 용산소 전극을 검사하여 데이터가 정확한지 확보한다.
3. 생산 확대: 분할식 조작은 직접 공업 규모 (예: 12000L) 로 확대할 수 있지만, 교반과 전질 효율을 최적화해야 한다.
이상의 절차를 통해 세포배양생물반응기의 조작을 능률적으로 완수할수 있으며 단클론항체, 백신 등 생물제품의 생산에 적용된다.